目的观察Bcl2基因转染对骨髓间充质干细胞(MSCs)体外模拟缺血*损伤的保护作用,从而为下一步Bcl2基因修饰的MSCs移植治疗脑缺血的实验研究奠定基础.方法采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠MSCs,对培养第5代的MSCs进行鉴定;用脂质体转染法对MSCs行人Bel2(hBcb2)基因转染,转染后用G418进行筛选,然后用免疫荧光细胞化学技术检测其蛋白的表达;采用血清剥夺和缺氧(SOD)处理建立MSCs体外模拟缺血*损伤模型,通过流式细胞术和TUNEL原位细胞凋亡检测评价转染hBcl2基因的MSCs和未转染的MSCs的凋亡及存活情况.结果密度梯度离心结合贴壁法能有效分离、纯化大鼠MSCs,免疫组化检测显示培养的细胞CD44、CD71表达阳*,而CD45表达**;转染hBcl2基因的MSCs经G418筛选后有hBd2蛋白的稳定、高效的表达;流式细胞术检测显示和MSCs相比,转染hBcb2基因的MSCs在SOD后及9h凋亡细胞较少,存活细胞较多.TUNEL原位细胞凋亡检测也显示转染hBcl2基因的MSCs的凋亡明显减少(P<0.05).结论转染hBcl2基因的MSCs有其蛋白的稳定表达,hBcl2基因转染可对抗MSCs体外模拟缺血*损伤引起的细胞凋亡,从而具有保护*作用.
梅元武,张红,郑丽芳,郭远瑾,徐江华(华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科,武汉,430022)
